PCR (Reação em cadeia de polimerase

Description

Bio Mol Biologia Molecular Mind Map on PCR (Reação em cadeia de polimerase, created by Stefany Nunes on 08/06/2016.
Stefany Nunes
Mind Map by Stefany Nunes, updated more than 1 year ago
Stefany Nunes
Created by Stefany Nunes almost 8 years ago
136
0

Resource summary

PCR (Reação em cadeia de polimerase
  1. Amplificação de um segmento especifico de DNA dentro de um genoma (gene ou parte dele)
    1. Reproduzir in vitro muitas cópias de um fragmento
      1. PRINCIPIOS BÁSICOS
        1. Estrutura de DNA
          1. Uso de primers c/ um grupo 3 ´OH - para adição de novos nucleotideos
          2. Produção de fita complementar
            1. Nucleot. dATP, dGTP, dCTP, dTTP.
              1. Complementa o que o prime começou
              2. Condições ionicas favoraveis
                1. REAÇÃO DE PCR
                  1. DNA alvo
                    1. DNA polimerase
                      1. os 4 dNTP (substratos para o dna polimerase)
                        1. Primers/oligonucleotideos
                          1. Íons de Mg
                            1. Solução tampão
                              1. ETAPAS DE AMPLIFICAÇÃO
                                1. Desnaturação (melting) 94º C
                                  1. Abertura de fita de DNA/ tempo não varia nessa etapa
                                  2. Anelamento 52º C
                                    1. Temp. varia dependendo do primer
                                    2. Polimerização 72ºC
                                      1. Polimerase (Taq polimerase) se liga ao iniciador - temp. não varia
                                      2. 25 a 25 ciclos
                                        1. PRODUTO DA PCR
                                          1. vVisualização em gel de agarose corado com brometo de etídeo
                                            1. PROGRESSO DA PCR
                                              1. Tac polimerase
                                                1. Termocicladores
                                    3. VANTAGENS
                                      1. Execução simples e rápida
                                        1. Requer quantidades de pequenas de DNA
                                          1. Elevada sensibilidade
                                            1. Baixo custo
                                            2. LIMITAÇÕES
                                              1. Falhas de amplificação
                                                1. Contaminação
                                                  1. Amplificação inespecifica
                                                  2. MODALIDADES
                                                    1. RT-PCR - reação em cadeia da polimerase pela transcriptase reversa
                                                      1. Síntese de cRNA (RNA complementar) a partir de RNAm ; amplificação de RNAm
                                                      2. Multiplex
                                                        1. Utilizada para amplificação de várias regiões do DNA simultaneamente (alvos multiplos)
                                                          1. Visualização em gel de agarose: fragmentos com diferentes tamanhos
                                                          2. Nested
                                                            1. Aumenta a sensibilidade da reação
                                                              1. 2 conjuntos de primers
                                                                1. O produto da 1ª amplificação é submetida a uma 2ª reação com outro par de primer mais especifico
                                                                2. Long - PCR
                                                                  1. Para ampliificar fragmentos grandes de DNA , de até 20kb
                                                                  2. PCR Quantitativo
                                                                    1. determina o nivel e expressão do RNAm em celula, tecidos
                                                                      1. PCR quantitativo em tempo real - detecção da expressão de um gene a medida que o DNA dupla fita vai sendo gerado
                                                                        1. RNAm , cDNA, PCR quantitativo
                                                                      Show full summary Hide full summary

                                                                      Similar

                                                                      Modificações epigenéticas do genoma
                                                                      Marcos Shimano
                                                                      Replicação, Transcrição e Tradução
                                                                      Christyan LB
                                                                      Ciências ômicas
                                                                      Samira Faria
                                                                      DNA X RNA
                                                                      Walter Luiz
                                                                      Microarranjo de DNA
                                                                      Vinicius Duarte
                                                                      Replicação e reparo do DNA
                                                                      Rafaella Costa
                                                                      Biologia Molecular
                                                                      Danielli Suzel
                                                                      Polimorfismos Genéticos
                                                                      Bruno Sant'Anna
                                                                      Transdução do sinal
                                                                      Vitória França
                                                                      Transdução do sinal
                                                                      Barbara Christina Batista Santos
                                                                      biologia
                                                                      rayane santos