Cromatografia

Cromatografia

1. Cromatografia Líquida

   • O fluido é um solvente
     • A fase estacionária é constituída de partículas sólidas empacotadas em uma coluna, a qual é atravessada pela fase móvel.
       • As forças elementares que agem sobre as moléculas são de cinco tipos: 1) Forças de dispersão de London ou forças de Van der Waals; 2) Interações de dipolo induzido; 3) Ligações de hidrogênio; 4) Interações dielétricas; 5) Interações eletrostáticas e coulombianas.
   • Na cromatografia líquida clássica (CLC) o recheio da coluna é utilizado geralmente uma só vez, porque parte da amostra usualmente se adsorve de forma irreversível.
     • A aplicação da amostra, para ser feita corretamente, requer alguma habilidade, fatos que representam um desperdício de material e tempo
       • As separações requerem, geralmente, várias horas e a detecção e a quantificação das frações são realizadas por análise manual.
   • Na Cromatografia Líquida de alta eficiência (CLAE) emprega-se um coluna fechada, reaproveitável
     • Até centenas de separações individuais podem ser realizadas com a mesma coluna.
     • É necessário empregar sistemas de bomba de alta pressão (até 400 bars) que fazem a fase móvel migrar a uma velocidade razoável através da coluna
       • Resultados: operações mais reprodutíveis, que tornam as análises executadas por CLAE mais precisas
         • precisão superior a + 0.5%
           • Os recheios para CLAE podem ser classificados de acordo com os seguintes aspectos: a) Sólidos rígidos, semi-rígidos ou não rígidos; b) Partículas porosas ou peliculares; c) Partículas esféricas ou irregulares; d) Partículas com diferentes diâmetros.
             • Há cinco tipos de fases estacionárias com diferentes mecanismos que regem as separações cromatográficas na CLAE
               • CROMATOGRAFIA LÍQUIDO-SÓLIDO OU POR ADSORÇÃO
                 • O mecanismo de separação da cromatografia líquido sólido (CLS), ou adsorção, se baseia na competição que existe entre moléculas da amostra e as da fase móvel em ocupar os sítios ativos na superfície de um sólido (fase estacionária)
               • CROMATOGRAFIA LÍQUIDO-LÍQUIDO OU POR PARTIÇÃO
                 • 0 mecanismo de separação neste tipo de cromatografia, ou mecanismo de distribuição como também é chamado, baseia-se nas diferentes solubilidades que apresentam os componentes da amostra na fase móvel e na fase estacionária. Então, os componentes mais solúveis na fase estacionária são seletivamente retidos por ela, enquanto os menos solúveis são transportados mais rapidamente pela fase móvel
               • CROMATOGRAFIA LÍQUIDA COM FASE LIGADA
                 • A fase estacionária para a cromatografia líquida com fase ligada (CLFL) surgiu como resposta aos problemas com a CLL
               • CROMATOGRAFIA LÍQUIDA POR TROCA IÔNICA
                 • Na cromatografia por troca iônica (CTI), a fase estacionária possui grupamentos iônicos quimicamente ligados que podem ser trocadores de cátions ou de ânions. Esses grupamentos apresentam contra-íons que são deslocados pelos íons da amostra
               • CROMATOGRAFIA LÍQUIDA POR EXCLUSÃO
                 • A cromatografia por exclusão tem sua resolução baseada no tamanho efetivo das moléculas dos componentes da amostra em solução. 
     • CLAE é um método ideal para a separação de espécies iônicas ou macromoléculas de interesse biológico e produtos naturais lábeis
       • Vantagens
         • Menor tempo de análise
           • Alta resolução
             • Resultados quantitativos
               • Boa sensibilidade
                 • Versatilidade
                   • Automação
       • Desvantagens
         • Alto custo da instrumentação
           • Alto custo de operação
             • Pouco usada para análises qualitativas
               • Falta de detector universal sensível
                 • Necessidade de experiência no seu manuseio

2. Cromatografia Gasosa

   • O fluido é um gás
     • As forças elementares que agem sobre as moléculas são de cinco tipos: 1) Forças de dispersão de London ou forças de Van der Waals; 2) Interações de dipolo induzido; 3) Ligações de hidrogênio; 4) Interações dielétricas; 5) Interações eletrostáticas e coulombianas.
   • É necessário que a amostra seja suficientemente volátil
     • a fim de que possa passar através da coluna na forma de vapor, e estável termicamente para não se decompor nas condições de separação
     • Os métodos de detecção utilizados em CG são mais rápidos e sensíveis
       • A aparelhagem mais fácil de ser manipulada e mais barata
     • Vantagem: uma fase cromatográfica e maior variedade de possíveis mecanismos de separação
   • Os componentes da mistura são vaporizados e, de acordo com suas propriedades, bem como as da FE, são retidos e eluidos através da coluna em tempos diferentes
     • Com o uso de detectores adequados, é possível a realizar análises quantitativas com elevada sensibilidade, podendo atingir LD menores 10–12 g
       • É uma técnica empregada na análise de substâncias voláteis e TERMICAMENTE ESTÁVEIS
         • A temperatura da coluna é um importante parâmetro, que deve ser rigorosamente controlado dentro de poucos décimos para quantificação com precisão
           • O detector responde à mudanças na condutividade térmica. Neste sentido, as condutividades do soluto e do gás de araste deve diferenciar o máximo possíve
   • Vantagens
     • alto poder de resolução
       • sensibilidade
         • pequenas quantidades de amostra
           • análise quantitativa
   • Desvantagens
     • substâncias voláteis e estáveis termicamente
       • requer preparo da amostra
         • tempo e custo elevado
           • eficiência qualitativa limitada